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里来分享 | 细胞转染实验常见问题Q&A
来源: | 作者:cdllsw | 发布时间: 2020-06-02 | 753 次浏览 | 分享到:

里来分享 | 细胞转染实验常见问题Q&A

细胞转染是外源基因进入真核细胞的一种重要方法。这些外源DNA或RNA通过转染试剂的包装辅助才能顺利进入细胞,发挥相应的作用,进而研究其细胞功能及相应的影响。广泛应用于基因功能研究、调控基因表达、癌症、疾病模型相关研究和重组蛋白研究等生物学试验。

里来为您 精心整理,细胞转染相关实验问题!



Q:miRNA agomir/antagomir针对不同的器官如何给药?给药的推荐量是多大?给药频率是多少?

A:给药方法大致分为系统给药(如静脉给药、腹腔给药等)和局部给药(如皮下注射,玻璃体给药,鞘内给药等)。给药方法的选择需要根据不同的器官来选择,而给药量因不同的给药量而异。如肝脏、肾脏常用静脉注射(系统给药);而皮下肿瘤则常用到瘤内注射(局部给药)。系统给药(仅供参考): agomir每次注射5~20nmol/20g体重, antagomir每次注射50~200nmol/20g体重;局部给药: agomir每次注射1~5nmol,antagomir每次注射5-20nmol。给药频率往往是一周2~3次。



Q:如何选择转染方法和转染试剂?

A:转染方法和转染试剂的选择要根据不同细胞来选择,里来生物提供从siRNA/miRNA、mRNA/长链RNA到蛋白质的全系列转染试剂,请根据下表确定适合您的转染试剂



Q:对于难转染的细胞,应该如何提高其转染效率?转染效率又该如何确定?

A:转染效率高低取决于细胞自身及转染方法,与siRNA序列无直接的关系。



Q:转染时的培养基要求,可否含血清?

A:不同的转染试剂要求可能不同,具体请依照实际说明书。对于部分转染试剂,在配制混合物时不能含有血清,但细胞培养基可以含有血清,但不能含有抗生素。



Q:siRNA储存液体浓度和工作浓度有何区别?

A:siRNA的贮存浓度就是保存的最佳浓度,锐博推荐的贮存液浓度为20 μM;而siRNA的工作浓度是使siRNA能够达到最佳沉默效果的转染浓度。


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