成都里来生物科技有限公司,欢迎您的咨询!全国免费热线:400-028-5268
标题摘要内容
科研干货!国内外文献查询工具!
来源: | 作者:cdllsw | 发布时间: 2020-06-02 | 402 次浏览 | 分享到:

里来分享 | PCR技术相关Q&A

里来分享 | PCR技术相关Q&A

2020年,世界真正成为了命运共同体。

而目前新冠肺炎的确诊主要还是依赖于实验室诊断,所以病毒检测工作的质量在防控疫情中起到重要作用。

新型冠状病毒检测方法有:核酸检测、病毒分离、血清学检测等。目前主要的是核酸检测;其中以实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测最为常用



简介


RT-PCR 加样

RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA 的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。

RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。


常规检测步骤




PCR技术相关Q&A


1.PCR实验耗材需要高压灭菌吗?



PCR专用的,有无菌无酶标注的实验耗材,可不进行高压灭菌处理!


因为这些耗材都是从塑料颗粒热压塑形出来的,并不存在实验污染的病原核酸,由于高压并不能使DNA酶和RNA酶完全失去活性,反而高压会使Tip头和离心管发生变形,导致使用时封闭不严,严重影响实验效率和实验质量,而且高压灭菌过程也可能是污染传播的过程。

理应进行高温灭菌处理。




2.高压灭菌、紫外照射、酒精喷洒和有效氯处理哪种清除污染最有效?



我们对纯化的基因组核酸和扩增产物制备成一定的浓度,一般会采用高压灭菌、紫外照射、酒精喷洒和有效氯浸泡的方式进行处理,然后对处理样本进行核酸纯化和PCR扩增。


多次验证结果表明,高压灭菌、酒精喷洒和紫外照射对扩增产物造成的污染有一定的效果。但采用0.2%~0.5%的有效氯消毒液浸泡,对核酸污染的清除效果非常显著,实验表明,按以上终浓度的有效氯消毒液处理半小时,可以使104IU/ml的基因组核酸下降到20IU/ml以下。

网赌app平台集中