成都里来生物科技有限公司,欢迎您的咨询!全国免费热线:400-028-5268
标题摘要内容
Western Blot结果问题条带图示+全面分析,再也不怕找到原因!
来源: | 作者:cdllsw | 发布时间: 2020-04-28 | 3893 次浏览 | 分享到:
Western Blot技术从提出至今已经有四十余年的时间了,如今仍然广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。然而想要得到一张条带清晰、没有杂带、背景干净的图片,还是具有一定挑战性的,即使出现了有问题的条带也不用慌张,里来分享结果条带图示+全面分析,方便大家优化WB实验进程与结果判定!

Western Blot结果问题条带图示+全面分析,再也不怕找到原因!

Western Blot技术从提出至今已经有四十余年的时间了,如今仍然广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

然而想要得到一张条带清晰、没有杂带、背景干净的图片,还是具有一定挑战性的,即使出现了有问题的条带也不用慌张,里来分享结果条带图示+全面分析,方便大家优化WB实验进程与结果判定!


注:条带图片均来源于网络


01 没有任何显色


原因:具体原因比较多,如果单纯一张没有任何显色的X光片,最可能是一抗加成其他抗体,或者二抗种属加错了,比如兔的加成鼠的;

解决办法:仔细检查抗体是否加错,确认转膜没有问题;

经验:上图展示的是一点信号都没有,如果是这样大部分情况是抗体加错了。如果中间出现了细微的条带,可能原因是蛋白上样量太少,一抗浓度过低,ECL发光液失效。另外如果转膜出现了问题,比如膜放反了,自然是一张白片。



02 高背景




原因:封闭不够好,一抗浓度高,洗膜时间和次数不够;

解决办法:降低一抗浓度,增加洗膜时间和次数;

经验:高背景可能是WB中最常见出现的问题,目的条带单一清晰,但是其他地方有弥漫性较为均一的背景(比较连续的)。其实只要注意操作规范就很容易避免。



03 非特异性条带


原因:一抗非特异性与蛋白结合;

解决办法:更换一抗;

经验:绝大多数是因为一抗不好,无法判断哪一条是目的条带。如果实在没有更好的抗体,建议采用阴性对照和阳性对照来确定上述哪个条带是目的条带。当然这种情况下有一种很小几率的可能是一抗浓度太高引起的非特异性结合。



04 条带中出现边缘规则的白圈


原因:电转中膜和胶之间存在气泡;

解决办法:转膜前去掉膜和胶之间的气泡。



网赌app平台集中